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连翘提取物/β-环糊精包合工艺及其制剂研究

2018-08-02 09:21:41
连翘(Fructus Forsythiae)为木犀科连翘属植物连翘(Forsythia Suspensa(Thunb.)Vahl)的干燥果实,为常用中药。近年来研究发现:连翘中的主要有效成分连翘酯苷A具有极强的抗氧化能力,是一种天然的抗氧化剂。因此将连翘酯苷A开发为新药用于临床具有重要的现实意义。
  本研究运用现代科技手段,对连翘酯苷A的纯化工艺,制剂工艺,原料药和胶囊的质量标准,连翘提取物体内抗氧化活性以及对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用做了初步研究。
  1.连翘酯苷A的纯化工艺研究:首先通过静态吸附法筛选出连翘酯苷A的最佳吸附树脂为D101大孔吸附树脂。利用单因素和正交试验设计,考察了各因素对纯化工艺的影响,确定最优工艺为:直径∶柱高(R∶H)=1∶7,上样量0.26 g/ml(每ml柱材料体积上0.26 g药材),上样液浓度1.2 g/ml(每ml相当于1.2 g药材),先用3 BV蒸馏水除杂,然后用6 BV30%乙醇洗脱,连翘酯苷A纯度在50%以上。
  2.原料药质量标准的初步建立:遵照中国2005版药典,对原料药中水分、重金属、砷盐、微生物等进行考察,各项指标都符合要求。采用反相高效液相色谱法,测定了原料药中连翘酯苷A含量在50%-60%之间。
  3.连翘提取物/β-环糊精(β-CD)包合物的制备:首先采用手工研磨法对影响包合反应各因素逐一考察,找出主要影响因素,并利用正交试验筛选得出小试包合条件:连翘提取物和β-CD质量比为1∶3,pH为4.5,研磨时间为70 min,乙醇浓度为30%。然后利用胶体磨法进行放大实验得出最佳包合条件:连翘提取物,β-CD,溶剂量三者比为1(g)∶3(g)∶18(ml),溶剂30%乙醇,研磨时间15 min。
  4.连翘提取物/β-环糊精包合物胶囊制剂研究:通过考察胶囊内容物的吸湿百分率,流动性,崩解时限,确定包合物粉末直接装入胶囊,即可满足胶囊制剂要求。遵照中国2005版药典硬胶囊下规定,考察包合物胶囊水分,重金属,微生物,崩解时限,各项指标均符合要求。采用反相高效液相色谱法,测定了胶囊制剂中连翘酯苷A含药量在15%左右。
  5.连翘提取物的活性研究:以8月龄小鼠作为实验对象,灌胃给与50-200mg/kg连翘提取物30天。结果发现衰老小鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)含量提高,丙二醛(MDA)含量降低,与模型组比较有显著性差异。说明连翘提取物可以明显提高衰老小鼠体内抗氧化能力。通过小鼠连续4周给予含48%乙醇溶液,建立慢性酒精肝损伤小鼠模型。通过测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肝脏中MDA、谷胱氨酸(GSH)、SOD、甘油三酯(TG)和肝脏病理形态改变为指标,研究连翘酯苷A对肝脏损伤的保护作用。结果表明小鼠给药后血清ALT、AST明显降低,抗氧化酶SOD、GSH等活性呈上升趋势,接近正常水平,过氧化脂质产物MDA含量明显下降;可使肝脏升高的TG下降28%~34%,肝脏脂肪性变也明显减轻。说明连翘提取物对小鼠慢性酒精性肝损伤具有保护作用。